暗視野顯微鏡

1. 原理和結(jié)構(gòu)特點

    在日常生活中，室內(nèi)飛揚的微?；覊m是不易被看見的，但在暗的房間中若有一束 光線從門縫斜射進來，灰塵便粒?？梢娏耍@是光學上的丁達爾現(xiàn)象。暗視野顯微鏡就是利用此原理設(shè)計的。它的結(jié)構(gòu)特點主要是使用中央遮光板或暗視野聚光器，常用的是拋物面聚光器，使光源的中央光束被阻擋．不能由下而上地通過標本進入物鏡。從而使光線改變途徑，傾斜地照射在觀察的標本上，標本遇光發(fā)生反射或散 射，散射的光線投入物鏡內(nèi)，因而整個視野是黑暗的。在暗視野中所觀察到的是被檢物體的衍射光圖像．并非物體的本身，所以只能看到物體的存在和運動，不能辨清物體的細微結(jié)構(gòu)。但被檢物體為非均質(zhì)時，并大于1／2波長，則各級衍射光線同時進入物鏡，在某種程度上可觀察物體的構(gòu)造。一般暗視野顯微鏡雖看不清物體的細微結(jié)構(gòu)，但卻可分辨0.004um以上的微粒的存在和運動，這是普通顯微鏡(最大的分辨力為0.2um)所不具有的特性，可用以觀察活細胞的結(jié)構(gòu)和細 胞內(nèi)微粒的運動等。
(二)制作中央遮光板
    普通顯微鏡只要聚光器是可以拆卸的，支架的口徑適于安裝暗視野聚光器，即可改裝成暗視野顯微鏡。在無暗視野聚光器時，可用厚黑紙片制作一個中央遮光板，放在普通顯微鏡的聚光器下方的濾光片框上，也能得到暗視野效果。
    (1)．將顯微鏡聚光器調(diào)到最高位置，用低倍鏡對好焦距。
    (2)．取下目鏡，從鏡筒中觀察并調(diào)節(jié)光闌的大小，使其與鏡筒中所見物鏡的視野相等。
(3)．用厚黑紙剪制中央擋光板。外圈直徑與濾光片框架相同，中央部分的大小與調(diào)節(jié)好的光闌孔徑一樣(可用半透明的小紙片，放在通光孔處聚光鏡鏡面上，紙上顯示的光斑即為光闌的孔徑，再用圓規(guī)量取大小)。
(4)．將中央擋光板放在濾光片框架上，開大光闌進行樣品觀察。
　　如需使用高倍鏡作暗視野觀察，應(yīng)按高倍鏡對焦后的視野大小重新制作中央擋光板。
保存好各自制作的中央遮光板，以便在后面的實驗中使用。
   圖示中央遮光板
a．光圈孔徑
b．濾光片直徑
（三）使用方法
(1)．把暗視野聚光器裝在顯微鏡的聚光器支架上。
(2)．選用強的光源，但又要防止直射光線進入物鏡，所以一般用顯微鏡燈照明。
(3)．在聚光器和標本片之間要加一滴香柏油，目的是不使照明光線于聚光鏡上面進行全反射，達不到被檢物體，而得不到暗視野照明。
(4)．升降集光器，將集光鏡的焦點對準被檢物體，即以圓錐光束的頂點照射被檢物。如果聚光器能水平移動并附有中心調(diào)節(jié)裝置，則應(yīng)首先進行中心調(diào)節(jié)，使聚光器的光軸與顯微鏡的光軸嚴格位于一直線上。
(5)．選用與聚光器相應(yīng)的物鏡，調(diào)節(jié)焦距＜操作方法與普通顯微鏡相同＝，找到所需觀察的物像。（四）觀察觀察示教臺上暗視野顯微鏡下的活細胞。在黑暗的背景里，可見細胞、細胞核和細胞器的衍射光圖像。